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穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建需要注意些什么？
原載自：linai8768.com[行情動(dòng)態(tài)] 2020-04-09 瀏覽次數(shù)：1441
對(duì)于需要往動(dòng)物體內(nèi)注射表達(dá)有外源片段的細(xì)胞需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株，以防止注射入動(dòng)物體內(nèi)后，很快外源片段表達(dá)丟失。此外，細(xì)胞個(gè)體差異(同一類細(xì)胞，不同個(gè)體細(xì)胞基因組存在差異)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有干擾，需要構(gòu)建單克隆細(xì)胞株去除干擾。
由于細(xì)胞個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響。體外培養(yǎng)非原代細(xì)胞，多為轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或者癌細(xì)胞，細(xì)胞個(gè)體差異大，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染或者使用腺病毒/腺相關(guān)病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)更可以反映細(xì)胞群體行為。或者使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體構(gòu)建混合穩(wěn)定株。
細(xì)胞株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)需要注意哪些因素？
1.外源插入片段的拷貝數(shù)。多數(shù)情況下，低拷貝甚至是單拷貝可以減少人為實(shí)驗(yàn)因素的干擾。
2.整合的幾率，這不僅決定了穩(wěn)定株篩選的難易程度，而且還可以幫助人們更容易得到混合穩(wěn)定株。
3.整合位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄活躍度，決定了穩(wěn)定株中外源片段的表達(dá)質(zhì)量。理想的狀況是單拷貝，但轉(zhuǎn)錄活性比較高。
4.整合后的穩(wěn)定性。不同的整合位點(diǎn)決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定性，有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失，從而導(dǎo)致穩(wěn)定株再次丟失的情況。
5.使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個(gè)不同單克隆穩(wěn)定株。因?yàn)榉€(wěn)定整合往往伴隨這插入失活宿主內(nèi)源基因，所以實(shí)驗(yàn)時(shí)通過使用混合穩(wěn)定株，或者對(duì)多個(gè)單克隆穩(wěn)定株進(jìn)行比較，可以幫助研究人員獲得更精確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
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